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細(xì)胞簡(jiǎn)介：

人上皮分離自組織；是機(jī)體重要的淋巴器官，其功能與免疫緊密相關(guān)，是T細(xì)胞分化、發(fā)育、成熟的場(chǎng)所，還可以分泌激素及激素類物質(zhì)，具有內(nèi)分泌技能的器官。上皮細(xì)胞和細(xì)胞是微環(huán)境的重要組成部分，其外，上皮細(xì)胞組成了細(xì)胞不同發(fā)育階段的三維結(jié)構(gòu)，根據(jù)其在中位置不同，可分為皮質(zhì)上皮細(xì)胞和髓質(zhì)上皮細(xì)胞。細(xì)胞的發(fā)育和成熟是通過(guò)在皮質(zhì)和髓質(zhì)上皮細(xì)胞的遷移過(guò)程中相互作用完成的。此外，細(xì)胞通過(guò)皮質(zhì)上皮細(xì)胞介導(dǎo)的陽(yáng)性選擇和髓質(zhì)上皮細(xì)胞介導(dǎo)的陰性選擇發(fā)育為能夠識(shí)別和耐受自身主要組織相容復(fù)合體和自身抗原的成熟T淋巴細(xì)胞。上皮細(xì)胞是構(gòu)成微環(huán)境的主要成份，其形態(tài)、分布和功能多樣。表面抗原表達(dá)具有高度異質(zhì)性，與細(xì)胞結(jié)合成不同類型復(fù)合體，部分上皮細(xì)胞相互排列構(gòu)成囊泡樣結(jié)構(gòu)。電鏡觀察，可把上皮細(xì)胞分為3-6型，用抗上皮細(xì)胞單克隆抗體熒光染色可把上皮細(xì)胞分為9種類型。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人上皮采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過(guò)上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人上皮經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠粒細(xì)胞趨化蛋白2(GCP2)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： GCP2 ELISA Kit

Monkey leukoiene C4 (LTC4) ELISA Kit白三烯C4(LTC4)檢測(cè)試劑盒

RatCyclosporineA,CsAELISAKit 大鼠A(CsA)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforGALELISAKit大鼠甘肽/甘素

細(xì)胞胱(cystine)含量高效液相色譜法定量檢測(cè)試劑盒20次

ratProstaglandinF,PG-FELISAKit大鼠前列腺素F(PGF)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

HAVCR1重組小鼠 KIM-1 / TIM1 / HAVCR1 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽) Protein

CD133 造血干細(xì)胞抗原(多肽抗原 0.5mgCD133 造血干細(xì)胞抗原(多肽抗原)

NRN1重組人 NRN1 / Neuritin 1 蛋白 Protein

IGFBP7 Protein Human 重組人 IGFBP7 / IBP-7 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

TF Protein Rat 重組大鼠 Transferrin / TF 蛋白

CD133 造血干細(xì)胞抗原(多肽抗原 0.5mgCD133 造血干細(xì)胞抗原(多肽抗原)

IGFBP7 Protein Human 重組人 IGFBP7 / IBP-7 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

HAVCR1重組小鼠 KIM-1 / TIM1 / HAVCR1 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽) Protein

TF Protein Rat 重組大鼠 Transferrin / TF 蛋白

NRN1重組人 NRN1 / Neuritin 1 蛋白 Protein

豚鼠主要組織相容性復(fù)合體(MHC/GPLA)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： MHC/GPLA ELISA Kit

Human protein kinase B (PKB) ELISA Kit 人蛋白激酶B(PKB)檢測(cè)試劑盒

Monkeytumornecrosisfactor-relatedapoptosis-inducingligand3,AIL-R3ELISAKit壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體3(AIL-R3)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforBMP-6(HumanBoneMorphogeneticProtein6)ELISAKit人骨形成蛋白6

細(xì)菌脈沖凝膠電泳DNA樣品制備試劑盒10次

rabbitNervegrowthfactor,NGFELISAKit兔子神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

人胸腺上皮細(xì)胞水質(zhì)檢測(cè)儀、比色計(jì)專用試劑   Water quality detector, colorimeic reage

便攜式臭氧比色計(jì)   Poable ozone colorimeic meter

便攜式余/總比色計(jì)   Poable  / total  colorimeter

便攜式亞鹽比色計(jì)   Poable niite colorimeic meter

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。