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① 組織塊培養(yǎng)法

組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。

② 消化培養(yǎng)法

③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法

對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無(wú)需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

④器官培養(yǎng)

器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

產(chǎn)品名稱(chēng)：兔終板軟骨細(xì)胞

英文名稱(chēng)：Rabbit Endplate Chondrocyte Cells

組織來(lái)源：椎間盤(pán)

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

兔終板軟骨分離自椎間盤(pán)終板軟骨組織；椎體終板是椎體在生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中，椎體上下面的骨骺板骨化停止后形成骨板，呈輕度凹陷，即為骨性終板。椎體終板的中央仍為一薄層透明軟骨覆蓋，并終生存在，即為軟骨終板，上下軟骨終板與髓核和纖維環(huán)連接共同構(gòu)成椎間盤(pán)。椎體終板構(gòu)成了椎間盤(pán)的上下邊界，位于椎體中心的松質(zhì)骨和椎間盤(pán)之間。是由軟骨下骨和厚度相當(dāng)?shù)母采w其上的軟骨組成。主要作用是防止椎間盤(pán)髓核組織嵌入椎體，同時(shí)具有平衡分散應(yīng)力的作用。成熟的終板軟骨細(xì)胞多2-8個(gè)成群分布于軟骨陷窩內(nèi)，這些終板軟骨細(xì)胞由同一個(gè)母細(xì)胞分裂增殖而成，稱(chēng)為同源細(xì)胞群。電鏡下，終板軟骨細(xì)胞有突起和皺褶，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有大量的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和發(fā)達(dá)的高爾基復(fù)合體及少量的線粒體。在組織切片中，終板軟骨細(xì)胞收縮為不規(guī)則形，在軟骨囊和細(xì)胞之間出現(xiàn)較大的腔隙。體外培養(yǎng)的終板軟骨細(xì)胞對(duì)于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。

實(shí)驗(yàn)室分離的兔終板軟骨采用膠原酶-聯(lián)合消化并結(jié)合軟骨細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的兔終板軟骨經(jīng)Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每3-4天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：梭形、多角形

傳代特性：可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔終板軟骨體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專(zhuān)用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

取材→分離→培養(yǎng)和維持

1、取材

人和動(dòng)物細(xì)胞的取材是原代細(xì)胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細(xì)胞的體外培養(yǎng)。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鮮和保鮮

② 應(yīng)嚴(yán)格無(wú)菌

③ 防止機(jī)械損傷

④ 去除無(wú)用組織和避免干燥

⑤ 應(yīng)注意組織類(lèi)型、分化程度、年齡等

⑥ 作好記錄

2、分離

人或動(dòng)物體內(nèi)(或胚胎組織)由于多種細(xì)胞結(jié)合緊密，不利于各個(gè)細(xì)胞在體外培養(yǎng)中生長(zhǎng)繁殖，必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開(kāi)，使細(xì)胞解離出來(lái)。

(1)懸浮細(xì)胞的分離方法

組織材料若來(lái)自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。

(2)實(shí)體組織材料的分離方法

對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法(物理裂解)和消化分離法。

① 機(jī)械分散法

特點(diǎn):簡(jiǎn)便、快速,但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。

② 消化分離法

組織消化法是把組織剪切成較小團(tuán)塊(或糊狀)，應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。

大鼠17-酮類(lèi)固醇(17-KS)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： 17-KS ELISA Kit

Mouse thyroid peroxidase (TPO) ELISA Kit 小鼠甲狀腺過(guò)氧化物酶(TPO)檢測(cè)試劑盒

MousecrosslinkedN-telopeptideoftypeⅠcollagen,XELISAKit 小鼠Ⅰ型膠原N末端肽(X)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumanpreptinELISAKit人preptin

通用型豬圓環(huán)病毒(CIRCOVIRUS)試劑盒20次

ELISAKitET-1大鼠內(nèi)皮素1

CCL17重組食蟹猴 CCL17 / TARC 蛋白 Protein

Metal ion transporter 擬南介金屬離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(抗原 0.5mgMetal ion transporter 擬南介金屬離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(抗原)

PDE9A重組人 PDE9A 蛋白 Protein

COMMD9 Protein Human 重組人 COMMD9 蛋白

TIGIT Protein Mouse 重組小鼠 TIGIT / VSTM3 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

Metal ion transporter 擬南介金屬離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(抗原 0.5mgMetal ion transporter 擬南介金屬離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(抗原)

COMMD9 Protein Human 重組人 COMMD9 蛋白

CCL17重組食蟹猴 CCL17 / TARC 蛋白 Protein

TIGIT Protein Mouse 重組小鼠 TIGIT / VSTM3 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

PDE9A重組人 PDE9A 蛋白 Protein

小鼠三0酸腺苷(ATP)檢測(cè)試劑盒 96T/48T

Human endocrine gland vascular endothelial growth factor (EG-VEGF) ELISA Kit 人內(nèi)分泌腺來(lái)源的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(EG-VEGF)檢測(cè)試劑盒

Humanbeta2glycoprotein,β2-GPELISAKit 人β2糖蛋白(β2-GP)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

GuineaPig50%complemehemolysis,CH50檢測(cè)試劑盒豚鼠血清總補(bǔ)體(CH50)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

真菌/酵母0脂酶D1(PhospholipaseD1)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

MouseClaracellprotein,CC16ELISAKit小鼠克拉拉細(xì)胞蛋白(CC16)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

兔終板軟骨細(xì)胞小鼠Ⅷ相關(guān)抗原(FⅧ-Ag)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠Ⅱ(FⅡ)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠受體()檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠抗復(fù)合物(TAT)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。

1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。

T-25培養(yǎng)瓶充滿培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。

本公司的所有產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)科研等非醫(yī)療目的，不可用于人類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用